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乔羽生物：抗体的提取与纯化-分泌型IgA的提取
人阅读 发布时间：2016-12-05 15:16
——以下由上海乔羽提供仅参考，详情来电！
关键词：抗体 IgA型抗体 凝胶 酪蛋白 蛋白浓缩液 DEAE-52纤维素
原理
通过凝胶过滤并进一步采用离子交换，可以纯化IgA型抗体。
试剂与材料
初乳
Sephadex G200 凝胶
DEAE-52纤维素
pH7.4,0.01mol/L PB
蛋白收集仪、层析管、紫外分析仪等
操作步骤
1、100ml初乳，10000rpm离心10min，分为三层，上层黄色的是脂肪，中间层为乳清，白色的沉淀是酪蛋白。用吸管吸取中间层，装入透析袋，浓缩蛋白至10mg/mL左右。
2、取直径×长为2.5cm×100cm的层析柱，填装Sephadex G200凝胶，用洗脱液平衡凝胶柱。
3、取10ml乳清液，过Sephadex G200柱，用pH7.4,0.01mol/L PBS洗脱，流速控制在0.25ml/min，第一峰（F1峰）为IgA（包含IgG）。浓缩蛋白至5mg/mL左右。
4、取直径×长为2.5cm×25cm的层析柱，填装DEAE-52纤维素。
5、取4ml F1峰蛋白浓缩液，过DEAE-52柱，用pH7.4,0.01mol/L PB-pH6.4,0.1mol/L PB梯度洗脱，用蛋白收集仪收集洗脱液，每管收集2ml。自动紫外比色，描绘洗脱峰曲线。第一峰为IgG，第二峰为IgA。
6、收集合并峰值洗脱溶液。浓缩后鉴定、分装保存。
关键词：抗体 IgA型抗体 凝胶 酪蛋白 蛋白浓缩液 DEAE-52纤维素
原理
通过凝胶过滤并进一步采用离子交换，可以纯化IgA型抗体。
试剂与材料
初乳
Sephadex G200 凝胶
DEAE-52纤维素
pH7.4,0.01mol/L PB
蛋白收集仪、层析管、紫外分析仪等
操作步骤
1、100ml初乳，10000rpm离心10min，分为三层，上层黄色的是脂肪，中间层为乳清，白色的沉淀是酪蛋白。用吸管吸取中间层，装入透析袋，浓缩蛋白至10mg/mL左右。
2、取直径×长为2.5cm×100cm的层析柱，填装Sephadex G200凝胶，用洗脱液平衡凝胶柱。
3、取10ml乳清液，过Sephadex G200柱，用pH7.4,0.01mol/L PBS洗脱，流速控制在0.25ml/min，第一峰（F1峰）为IgA（包含IgG）。浓缩蛋白至5mg/mL左右。
4、取直径×长为2.5cm×25cm的层析柱，填装DEAE-52纤维素。
5、取4ml F1峰蛋白浓缩液，过DEAE-52柱，用pH7.4,0.01mol/L PB-pH6.4,0.1mol/L PB梯度洗脱，用蛋白收集仪收集洗脱液，每管收集2ml。自动紫外比色，描绘洗脱峰曲线。第一峰为IgG，第二峰为IgA。
6、收集合并峰值洗脱溶液。浓缩后鉴定、分装保存。
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