上海乔羽生物科技有限公司

http://qybio.biomart.cn

公众号

扫一扫
进入手机商铺

商家诚信度:
成立时间:2015年
入驻丁香通年限:4年
商家等级:金牌客户
产品信息完整度:83%
公众号

微信扫一扫
关注公众号

产品分类
公司荣誉
公司图片
联系方式
 公司地址
上海市浦东新区新场镇笋南路193号
邮编:201200
 联系电话
021-58999639 13310162040
 传真号码
021-50760790
 电子邮箱
3063139112@qq.com
 公司网址
http://www.ym-sw.com
点击这里给我发消息
公司新闻

ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)操作步骤

发布时间:2018-04-19 17:17 |  点击次数:

上海远慕生化试剂厂家是专业从事各种科研实验试剂的老牌商家,经营的产品有很多,详细讲述ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) 的操作步骤,信息说明等咨讯,本品作为一款裂解液产品,具有去除细胞悬液中的红细胞之作用,可讲其分类为细胞组分分离,其同类产品有:Gey's红细胞裂解液(Gey's Lysis Buffer),红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×),Triton-NH4OH细胞裂解液,更多裂解液请来电咨询!

ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)操作步骤
ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)操作步骤

【操作步骤】

A、组织细胞样本的常规操作

1、制备细胞悬液: 新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理,通过适当方法制备成细胞悬液,离心弃上清。

2、裂解:加入3~5倍细胞沉淀体积的ACK Lysis Buffer,轻柔吹打混匀,裂解1~2min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。

3、离心:4℃,400~500g离心5min,弃红色上清。如无低温离心机本步骤亦可在室温下操作。

4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3各一次。

5、洗涤:根据具体实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,轻柔混匀重悬沉淀。4℃,400~500g离心2~3min,弃上清,离心步骤亦可在室温下操作。所加入的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。

6、如有必要,重复上述步骤5一次,共洗涤1~2次。

7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。

B、组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)

1、制备细胞悬液:新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理,通过适当方法制备成细胞悬液,离心弃上清。

2、裂解:加入细胞5倍细胞沉淀体积的ACK Lysis Buffer,轻柔吹打混匀,裂解1~2min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。

3、加入15~20ml的 PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,轻柔混匀。

4、离心:4℃,400~500g离心5min,弃红色上清,本步骤亦可在室温下操作。

5、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2~4各一次。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。

C、血液样本的常规操作

1、取新鲜抗凝血,400~500g离心5min,离心弃上清。

2、裂解: 加入6~10倍细胞沉淀体积的ACK Lysis Buffer,轻柔吹打混匀,裂解1~5min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。(特别提醒:对于鼠的血液,裂解1~2min已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至4~5min,并且裂解过程中轻轻摇动以促进红细胞裂解)

3、离心:4℃,400~500g离心5min,弃红色上清。如无低温离心机本步骤亦可在室温下操作。

4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。

5、洗涤:根据具体实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,轻柔混匀重悬沉淀。4℃,400~500g离心2~3min,弃上清,离心步骤亦可在室温下操作。所加入的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。

注意: 对于微量或少量的血液样本,可以不用第1步操作,加入10倍血液体积的ACK Lysis Buffer进行第2步操作,并在4℃或室温裂解4~15min。对于鼠的血液,裂解4~5min已经足够;对于人的外周血,宜延长裂解时间至10min,但通常不宜超过15min,并且裂解过程中宜适当摇动以促进红细胞裂解。

D、血液样本的快速操作(无需洗涤)

1、新鲜抗凝血中加入10倍体积的ACK Lysis Buffer,轻轻吹打混匀,裂解4~15min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。(特别提醒:对于鼠的血液,裂解4~5min已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10min,但通常不宜超过15min,并且裂解过程中宜适当摇动以促进红细胞裂解。

2、加入20~30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,轻柔混匀。

3、400~500g离心5min,弃红色上清。4℃离心效果更佳。

4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。

5、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。
 

ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)相关产品
Tris-氯化铵红细胞裂解液 Triton-NH4OH细胞裂解液
红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×) Gey's红细胞裂解液(Gey's Lysis Buffer)


标签:ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)