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ELISA测定试剂盒手工操作方法以及技术影响

人阅读 发布时间:2018-07-26 11:08

       ELISA测定试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。ELISA试剂盒试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。

ELISA测定试剂盒手工操作有浸泡式和流水冲刷式两种,浸泡式进程如下:
A、吸干或甩干孔内反应液;
B、用洗刷液过洗一遍(将洗刷液注满板孔后,即甩去);
C、浸泡,即将洗刷液注满板孔,放置1-2分钟,间歇摇晃,浸泡时间不可随意缩短;
D、吸干孔内液体,吸干应彻底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液体后在清洗毛巾或吸水纸上拍干;
E、重复操作c和d,洗刷3-4次(或按说明规矩)。

ELISA测定试剂盒操作技术的影响:
1)应保证清洁,整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸,以上的措施可以使“花板”降至最低限度,从而提高检测的特异性,并得到更准确。 
2)合理安排检测量,ELISA试剂盒以免反应板过多造成洗板等待时间长。
3)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4)用洗板机洗板时,保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后最好在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干,防止针口有纤维蛋白或异物,这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。
5)严重溶血:以HRP为标记的ELISA试剂盒测定中,残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性,催化底物显色造成假阳性。
减少ELISA测定试剂盒误差的方法
1.做实验时少说话,防止唾液掉进酶标条中。
2.加入一抗二抗需要放入37°。
3.如果同时做多个板子,多个板子别罗一起;尽量少用排枪。
4.加样时,由低浓度向高浓度加,这样减少跳孔的几率。
5.勤换枪头。

一、移液器的使用,加样(抗体)等需要准确定量的试剂时不使用排枪,经验证明排枪很不准确,极易跳孔,不要图便宜买低档的tips 因为ELISA不但会放大被检测的目的蛋白,也会放大非特异结合的杂质蛋白。
二、倍比稀释样品时,稀释倍数最好要小于10。
三、所有的装跟ELISA测定试剂盒相关试剂的容器,玻璃制品的要干烤过或者使用一次性的树脂容器。

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