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荧光素酶报告基因的检测流程以及优点

发布时间:2018-08-02 09:53 |  点击次数:

中文名称: 荧光素酶报告基因
英文名称:luciferin
底物:荧光素(luciferin)
生物荧光: bioluminescence
调用因子: 反式作用因子
转录因子: 行使调控基因表达的蛋白质分子

       Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。

荧光素酶报告基因的检测流程

1、重组质粒制备: 制备含有待检测基因-Luc/Rluc的重组质粒;
2、细胞系选择: 根据实验需要选择细胞株,通常选择转染效率较高的293T细胞或原代细胞等;
3、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染,设置不同的检测时间点,一般为24h/48h;
4、外界干预: 转染后,可进行物理/化学/病毒等的相应刺激;
5、细胞处理: 采用进口/国产双荧光素酶检测试剂盒依照protocol操作;
6、荧光检测: 使用GENios Pro 酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光强度检测。

荧光素酶报告基因的优点

1、优越的灵敏度,比Westernbloting灵敏度高1000倍以上;
2、内源性低,哺乳动物无内源性表达;
3、荧光素酶检测不受细胞内其他物质影响;
4、发光检测,检测方便;
5、灵敏度高,10‐20摩尔荧光素酶分子;
6、检测范围广,大于7个数量级。