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ELISA实验系统稳定应留意哪些原理吗?

发布时间:2018-08-09 11:45 |  点击次数:

ELISA检测系统可以说是现在使用最多的检测方法,而且技术手段很多,对于花板,假阳性,全显色,全部显色,显色比空缺还低,这些都起到了至关重要的作用,一定要多注意,那么elisa检测系统稳定,这些实验过程都要注意。

常用封锁剂有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。详细的试验还要有坚固的理论外也要实践,看一下终极可不可以应用到自己试验当中去。但终极选用什么,要依据试验详细来实践。


  应留意以下原理:因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用,这种物理吸附长短特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。


  还有有的包被原可能不是蛋白,对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被,亲和素生物素:先亲和素先包被载体,加入生物素化的DNA,这种包被方法平均、牢固,已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。


包被原的性质很重要,蛋白浓度,是否降解,这关系到你做出的抗体可不可以被其识别,所以保留抗原很重要,我做重组蛋白时,师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲,从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。但有时因为试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。