菠萝蛋白酶提取试剂

名称：菠萝蛋白酶提取试剂

产品规格：2×500ml

分类：细胞组分分离

储存条件:4℃,避光,6个月

用途:主要用于裂解植物组织，提取样品中的菠萝蛋白酶

注意事项:菠萝蛋白酶(Bromelain)简称菠萝酶，亦称凤梨酶、凤梨酵素等，是存在于菠萝植株中的蛋白水解酶，可从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到，菠萝蛋白酶已被广泛应用于食品、医药等行业。利用吸附力、离子键、共价键等不同的联结方式，将酶与不溶性载体联结，制成固定化酶，可以很好的避免酶的失活，易于储存运输。供依据。

使用范围：仅限科研使用，不能应用于临床。

菠萝蛋白酶，相对分子质量为33　000，等电点为9.55，最适pH值为5.0～8.0，最适温度为40～70℃。菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白酶，广泛存在于菠萝的果实、芽、叶及茎中，能分解蛋白质、肽、酯和酰胺，其成品为浅黄色、无定形粉末，稍溶于水，不溶于乙醇、丙酮、氯仿、乙醚，微有臭味，其酶活性能被半胱氨酸激活，而受重金属抑制。菠萝蛋白酶用途广泛，可用于干酪、明胶、水解蛋白的生产，也可作为一种食品添加剂，可使肉质嫩化、啤酒澄清，还可以治疗生物体水肿及多种炎症，能迅速溶痂，对正常组织无害，适用于中、小面积深度烧伤的治疗。

要研究某种蛋白质的结构和功能，生产具有高生物活性的蛋白质类激素、酶等，第一步工作就是从复杂的混合体系中分离出蛋白质并且进行纯化分析。

1.蛋白质分离纯化的一般程序

（1）选择一种目的蛋白质含量丰富、稳定性好的样品材料。

（2）将目的蛋白质从样品中抽提出来。

（3）确定分离纯化的方法，使粗品的纯度达到预定要求。

（4）建立灵敏、特异、精确的检测手段，分步测定目的蛋白质的含量，检验目的蛋白质的纯度。

（5）在操作、分析过程中注意保护目的蛋白质的稳定性，防止其变性。

2.蛋白质的分离纯化方法

利用蛋白质溶解度不同的分离纯化方法有盐析法、等电点沉淀法等，主要生产方法有单宁沉析法、高岭土吸附法和超滤法。

盐析法是粗分离蛋白质的重要方法之一。在稀盐溶液中，蛋白质的溶解度随盐浓度的增加而升高，这种现象称为盐溶。但当盐浓度增加到一定量时，蛋白质溶解度又逐渐下降，直到某一浓度时便从溶液中析出，称为盐析。这是因为蛋白质分子吸附某种盐离子后，其带电表层使蛋白质分子彼此排斥，而蛋白质分子与水分子间的相互作用却加强，因而溶解度提高，但当大量中性盐加入时，水的活度降低，进而导致蛋白质分子表面的电荷逐渐被中和，水化层逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子相互聚集并从溶液中析出。

用于盐析的中性盐通常有硫酸铵、硫酸钠和硫酸镁等，而以硫酸铵的效果为最佳，它在水中溶解度大而温度系数小（在25℃时，其溶解度为767g／L；在0℃时，其溶解度为697g／L），分离效果好，能保持蛋白质的天然构象，且价廉易得。不同蛋白质在盐析时所需盐浓度不同，故调节盐浓度可适当将蛋白质分离。如鸡蛋清中的球蛋白在半饱和硫酸铵溶液中沉淀，清蛋白在饱和硫酸铵溶液中沉淀。

3.菠萝蛋白酶活性测定

酪蛋白是一种蛋白质，它被菠萝蛋白酶降解生成的酪氨酸在紫外光区275 nm波长处有吸收峰，根据测定275nm波长处的吸光度，可以判定菠萝蛋白酶的酶活性。吸光度的大小与酪氨酸含量的多少有关，吸光度大说明酪氨酸含量高，也意味着菠萝蛋白酶分解的酪蛋白多，酶活性也高。

4.菠萝蛋白酶的含量测定

由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白质溶液在紫外光区280nm波长处具有吸收峰。某蛋白质溶液的浓度与其在一定波长光线下的吸光度存在对应关系，即在一定浓度范围内，蛋白质溶液在此波长处的吸光度与其浓度成正比关系，因此利用这一性质可进行蛋白质定量测定。该方法迅速、简便，不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定，可测定浓度为0.1～1.0mg／mL的蛋白质溶液的蛋白质含量。

5.菠萝蛋白酶的纯度测定

冷冻干燥是指通过升华的方法从冻结的生物产品中去掉水分或其他溶剂的过程。升华是指溶剂（如水）像干冰一样，不经过液态，从固态直接变为气态的过程。冷冻干燥得到的产物称为冻干物。传统的干燥会引起材料皱缩，破坏细胞，在冷冻干燥的过程中样品的结构不会被破坏，因为固体成分被在其位置上的冰支持着。在冰升华时，它会在干燥的剩余物质里留下孔隙，这样就保留了产品的生物和化学结构及其活性的完整性。

在实验室中，冷冻干燥有很多不同的用途，它在许多生物化学与制药应用中是不可缺少的，它被用于获得可长时期保存的生物材料，如酶、血液与药品，除长期保存的稳定性以外，它还保留了其固有的生物活性与结构。冷冻干燥能得到干燥状态的样品，使样品成分稳定，也不需改变样品的化学成分，是理想的分析辅助手段。