CAS:89382-89-2,QAE葡聚糖凝胶A-25使用方法

中文名称:QAE葡聚糖凝胶A-25
英文名称:QAE Sephadex A-25
CAS:89382-89-2
性    状：白色微球,干燥状
凝胶类型：离子交换填料，强碱型
结构成分：交联右旋糖酐
粒    径： 40-120μm
工作PH值：2-12
操作温度：4-40℃
总离子交换量：2.6-3.4mmol/g干胶
交换载量：1.5mg thyroglobulin/ml drained medium；10 mg HSA/ml drained medium；
110mg α-lactalbumin/ml drained medium；
保存条件：RT
应用：利用离子交换作用，纯化低分子质量蛋白、多肽、核苷酸及巨大分子等

使用方法
2.1 填料的准备
将干粉浸泡于纯水或缓冲液中，液体可以适当多加一些，室温下完全溶胀需1-2 天，或者用热水溶胀1小时（不要水浴）。完全溶胀后除去上清液以及上层少许漂浮物，用缓冲液彻底清洗填料。

2.2 装柱
（1）所有实验材料均需平衡至色谱层析操作的温度，所有的缓冲液进行脱气处理；
（2）检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。
（3）用去离子水清洗掉20%乙醇保存液，用缓冲液配成匀浆。
（4）将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。
（5）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
（6）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33 倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。

2.3 平衡柱子
用上样的平衡缓冲液平衡柱子后即可上样。（当流出液的pH 和电导值与起始缓冲液相同时层析柱即完全平衡）。

2.4 上样
样品应溶解在起始平衡缓冲液中，或者通过透析或脱盐的方法进行缓冲液置换，将样品缓冲液转移至起始平衡缓冲液。样品的粘度不应超过平衡缓冲液，上样前必须使用0.45um 微孔滤膜对样品进行过滤。
最常见的程序是让目标分子结合到离子交换柱上，其他杂质流出。然而，在一些情况下，离子交换柱结合杂质而使目标分子流出，这样的操作也是可以的。
对于目标分子的吸附，选择具有适当pH 的缓冲液是至关重要的。
缓冲液的离子强度应保持较低，以免干扰样品结合，推荐的操作pH 应在缓冲液pKa 的0.5 个单位内，并且和目标分子的等电点（pI）相差至少一个pH 单位。

2.5 洗脱
对于DEAE 葡聚糖凝胶和QAE 葡聚糖凝胶填料，一般使用盐浓度递增或pH 值递减（线性或者阶梯梯度）的方式来进行洗脱。

2.6 再生
根据样品的性质，通常通过用高离子强度洗脱缓冲液，如2M NaCl 对柱子进行洗涤，或降低缓冲液pH，然后在平衡缓冲液中重新平衡来进行再生。在一些应用中，诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不下来，则需要通过在位清洗程序CIP 来清除。

2.7 在位清洗（CIP）
通过用5 倍柱床体积的2M NaCl 溶液来除去结合的蛋白质。
通过用2 倍柱床体积的0.1M NaOH 溶液清洗填料，随后立即用大量纯水彻底清洗直至中性，从而除去沉淀的蛋白质、疏水结合的蛋白质和脂蛋白。

3 保存
未使用的填料，请室温密闭保存。使用完的填料，用纯水彻底冲洗，用然后保存在20%乙醇中，4°C保存，不能冷冻。

4 注意事项
（1）上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用0.45um 的过滤器过滤。
（2）在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.1 摩尔。碱会使流速变慢。
（3）不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。
（4）离子交换介质在选择层析柱时，避免使用细长柱，会增加实验操作压力。