人心肌转录因子GATA4 ELISA试剂盒应用方法

产品名称： 人心肌转录因子GATA4 ELISA试剂盒
英文名称:Human cardiac transcription factor GATA4ELISA kit
规格：96T/48T
保存环境:2-8℃低温、避光、防潮
主要成分:酶标板,试剂,标准品等。
检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本..需要而未提供。

自备材料 
1．蒸馏水。 
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 
3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性 
1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 

操作步骤:
1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。
2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。
4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。
7、温育:重复4的操作。
8、洗板:重复5的操作。
9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,37℃避光显色15min。
10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

注意事项 
1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品 
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 
9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。