人Jo1抗体/抗组氨酰tRNA合成酶抗体(Jo1/HRS)ELISA试剂盒说明书

　　产品名称：人Jo1抗体/抗组氨酰tRNA合成酶抗体(Jo1/HRS)Elisa试剂盒

　　产品规格：96T

　　产品用途：科研实验

　　产品存储：2-8℃，有效期六个月

　　使用方法

　　样品收集、处理及保存方法应用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗体，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品浓度。

　　1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

　　3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

　　5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

　　自备物品

　　1.酶标仪（450nm）

　　2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3.37℃恒温箱

　　组成

　　1    30倍浓缩洗涤液    20ml×1瓶    7    终止液    6ml×1瓶

　　2    酶标试剂    6ml×1瓶    8    标准品    0.5ml×1瓶

　　3    酶标包被板    12孔×8条    9    标准品稀释液    1.5ml×1瓶

　　4    样品稀释液    6ml×1瓶    10    说明书    1份

　　5    显色剂A液    6ml×1瓶    11    封板膜    2张

　　6    显色剂B液    6ml×1/瓶    12    密封袋    1个

　　不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融标本要求

　　2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

　　使用方法

　　1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

　　5号标准品    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

　　4号标准品    150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

　　3号标准品    150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

　　2号标准品    150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

　　1号标准品    150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

　　2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于         酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

　　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7. 温育：操作同3。

　　8. 洗涤：操作同5。

　　9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

　　11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　计算

　　以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。