人H-ras ELISA Kit实验步骤

人H-ras ELISA Kit用途
该试剂盒采用“一步”夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）体外定量检测血清、血浆、组织、细胞或其他相关生物液体中H-ras浓度。

检测原理
将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，将未结合的抗体洗净后再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

反应类型    双抗夹心法
规格    96T/48T
中文名称    人H-ras ELISA试剂盒
反应时间    1.5 h
检测方法    酶联免疫吸附测定
检测范围    0.25 ng/mL – 8 ng/mL
灵敏度    0.1 ng/ml
上样体积    50 μL/孔
样本类型    血清、血浆、组织、细胞上清或其他生物样本

特异性
可检测样本中的H-ras , 且与其它类似物无明显交叉反应。

重复性
板内，板间变异系数均<10%。
 
批内差
取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

批间差
选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值

精密度
精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV（%）=SD/mean×100  CV<10% Inter-批间差: CV<13%

稳定性
经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

试剂盒的组成
▲未开封试剂盒，4℃保存；已开封，标准品-20℃保存，酶标板加干燥剂后密封-20℃保存，其他4℃保存。
英文名称    中文名称    规格    规格
Microe isa stripplate    包被微孔板    96T    48T
Standard    标准品    0.3ml/管*6    0.3ml/管*6
HRP-Corjugate    HRP标记抗体    10mL    5mL
Sample Diluent    样本稀释液    6mL    3mL
Chromogen SolutionA    底物液A    6mL    3mL
Chromogen SolutionB    底物液B    6mL    3mL
Stop Solution    终止液      6mL    3mL
20× Wash Solution    20×浓缩洗涤液    25mL    15mL
Product Description    说明书    1份    1份
Sealing film    封板膜    2张    2张

实验所需自备物品
1、450±10nm滤光片酶标仪（建议仪器使用前预热）  
2、高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.   
3、Eppendorf 移液器.   
4、蒸馏水或去离子水.   
5、脱脂棉吸水纸.   
6、37℃恒温箱.  
7、100ml和1000ml量筒.