RNAi实验方法：

 

上海乔羽采用质粒系统进行RNAi技术，对于转染困难的细胞或者需要长时间沉默的实验，我公司可以提供病毒包装转染服务，价格高于普通转染试剂转染。
 

实验主要步骤：

1.根据基因设计相关RNAi引物对

2.将合成的互补引物退火

3.线性化载体（用内切酶BglII和HindIII；或BglII和XhoI）

4.挑选阳性克隆

5.细胞转染

6.沉默效果鉴定

服务内容：

RNA 干扰流程

步骤一 确定干扰基因，设计并合成合适的小干扰RNA（片段型或载体型小干扰RNA）。

步骤二 预转染实验，进行细胞培养，摸索转染条件、时间并进行必要的检测（WB，PCR 等），确定干预效果最佳的一对小RNA。

步骤三 正式实验，设置合理实验分组，进行瞬时或稳定转染。

步骤四 转染后检测，根据实验要求选择细胞生物学检测、蛋白检测、分子生物学检测等。以研究小干扰RNA 对于细胞、蛋白或基因功能的影响。

RNA 干扰检测

细胞检测细胞增殖毒性MTT、 细胞凋亡细胞周期、 细胞迁移 细胞侵袭、蛋白检测免疫印迹 WB、 免疫细胞化学ICC 免疫荧光IF、流式细胞术FCM、 酶联免疫ELSIA、分子生物检测 RT-PCR 、实时荧光定量PCR、 甲基化特异性PCR(MSP)、生化检测酶类检测 脂类检测 糖类检测

收费标准：具体费用联系

服务周期：２月

结果提供：结果报告、代表性图片，合成报告、操作流程及相关试剂仪器信息。

样本提供需知：如干扰基因有确定的干扰片段/序列，按照以下流程进行

1-1）客户提供需要干预基因名称、ID 号、明确的干预序列

1-2）合成1 个针对目的基因的SiRNA（化学合成的干预片段）或SnRNA（以质粒构建的干

预载体，带荧光标签）

1-3）进行预实验，明确最佳的转染效率，选择一个干预RNA 进行正式实验

1-4）正式分组实验，进行转染以及收集细胞、开展下游检测（如WB、PCR、MTT、细胞侵袭实验、流式细胞术等）

如干扰基因无确定的干扰片段/序列，按照以下流程进行

2-1）客户提供需要干预基因名称、ID 号或者基因序列

2-2）合成1 套针对目的基因的SiRNA（化学合成干预片段）或SnRNA（以质粒构建的干预

载体，带荧光标签）

2-3）进行预实验，明确最佳的转染效率。

2-4）正式分组实验，进行转染以及收集细胞、开展下游检测（如WB、PCR、MTT、细胞

侵袭实验、流式细胞术等）

服务须知：

由客户提供基因或序列，技术服务完成后向客户提供详细的实验报告、测序单、质粒以及Western(或Realtime-PCR)鉴定结果图片。对于病毒转染，还将提供包装好的病毒颗粒。