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人免疫球蛋白G1(IgG1)实验原理及操作方法
人阅读 发布时间:2015-12-10 11:00
人免疫球蛋白G1(IgG1)
实验原理
人免疫球蛋白G1(IgG1)试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人免疫球蛋白G1(IgG1)水平。用纯化的人免疫球蛋白G1(IgG1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白G1(IgG1),再与HRP标记的免疫球蛋白G1(IgG1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白G1(IgG1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人免疫球蛋白G1(IgG1)浓度。
人免疫球蛋白G1(IgG1)
操作方法
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
上海乔羽生物科技有限公司专业代理美国R&D“人免疫球蛋白G1(IgG1)”试剂盒,用于测定人血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白G1(IgG1)含量,更多优惠价格,欢迎老师和同学们来电来函咨询!
实验原理
人免疫球蛋白G1(IgG1)试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人免疫球蛋白G1(IgG1)水平。用纯化的人免疫球蛋白G1(IgG1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白G1(IgG1),再与HRP标记的免疫球蛋白G1(IgG1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白G1(IgG1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人免疫球蛋白G1(IgG1)浓度。
人免疫球蛋白G1(IgG1)
操作方法
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
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