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支原体检测试剂盒说明书
人阅读 发布时间:2016-11-08 16:26
产品简介:
支原体(mycoplasma):又称霉形体,为目前发现的最小的最简单的原核生物,估计有15%~35%的细胞被支原体污染。支原体污染会对细胞造成多方面的影响,包括代谢、免疫或生化特性、生长状况、以及细胞存活等多方面的改变,影响实验结果的稳定性、可靠性和准确性;支原体难以检测,同时也很难消除,其能轻易地通过0.22μm标准滤膜,同时也能拮抗绝大多数的抗生素,给细胞培养造成巨大损失。因此细胞都需要定期(如每2~3个月)进行支原体污染的检测。许多方法可用于检测支原体,包括肉汤或琼脂培养,直接或间接的荧光染色、ELISA、直接或间接的PCR法等,其中,直接PCR法灵敏度高。本试剂盒能检测支原体种类包括M.Hyorhinis,M.Arginini,M.Orale,M.Fermentans,A.laidlawii等常见支原体,这5种支原体代表了98%以上的细胞支原体污染。同时还能检测Mycoplasma,Acholeplasma,Ureaplasma,Spiroplasma等种属。
产品实验【操作流程】
1、样品准备:在实验前几天,细胞需用无抗生素的培养基进行培养,待细胞生长至80%以上开始试验。
A、样品为细胞
1、弃去培养瓶内的细胞培养基。
2、用DPBS洗2次细胞。
3、加入适量的裂解液(以24孔板为例,每孔100ul)裂解细胞,室温放置5分钟。
4、收集细胞裂解液,放入离心管中。
5、细胞裂解液95°C处理5分钟。
6、13000rpm离心5分钟,上清转入一只新离心管。
7、取1~2ul上清作为模板进行PCR反应。
B、样品为培养上清
1、取1~1.5ml细胞培养上清,放入离心管中。
2、13000rpm离心5分钟。
3、弃上清,用DPBS洗沉淀一次。
4、加入100ul裂解液裂解细胞,上下颠倒混匀后,室温放置5分钟。
5、细胞裂解液95°C处理5分钟。
6、13000rpm离心5分钟,上清转入一只新离心管。
8、取1~2ul上清作为模板进行PCR反应。
2、PCR反应
本试剂盒提供的8连管已预加入反应引物(其中8号管同时已预加入阳性模板,为阳性对照),使用前请先离心后小心开启,以免飞扬丢失。Taq、pfu、KOD等酶及常规PCRMix都适用于本试剂盒的PCR反应,具体反应条件可以参考相关酶或者PCRMIX产品说明书。以Taq酶为例,推荐如下:
3、结果判定
在阴阳性对照成立的条件下,对样品结果进行判定
支原体检测试剂盒
【实验试例】
样品1为支原体检测阳性,其中M1污染严重,样品2和3为支原体检测阴性。
NEB100bpDNALadder
:100bp,200bp,300bp,400bp,500bp(加亮),600bp,700bp,800bp,900bp,1000bp(加亮),1200bp,1517bp。
上海乔羽生物主营产品:ELISA试剂盒,生化试剂,标准品对照品,试剂耗材,抗体,培养基,动物血清等等,欢迎来电咨询!
支原体(mycoplasma):又称霉形体,为目前发现的最小的最简单的原核生物,估计有15%~35%的细胞被支原体污染。支原体污染会对细胞造成多方面的影响,包括代谢、免疫或生化特性、生长状况、以及细胞存活等多方面的改变,影响实验结果的稳定性、可靠性和准确性;支原体难以检测,同时也很难消除,其能轻易地通过0.22μm标准滤膜,同时也能拮抗绝大多数的抗生素,给细胞培养造成巨大损失。因此细胞都需要定期(如每2~3个月)进行支原体污染的检测。许多方法可用于检测支原体,包括肉汤或琼脂培养,直接或间接的荧光染色、ELISA、直接或间接的PCR法等,其中,直接PCR法灵敏度高。本试剂盒能检测支原体种类包括M.Hyorhinis,M.Arginini,M.Orale,M.Fermentans,A.laidlawii等常见支原体,这5种支原体代表了98%以上的细胞支原体污染。同时还能检测Mycoplasma,Acholeplasma,Ureaplasma,Spiroplasma等种属。
产品实验【操作流程】
1、样品准备:在实验前几天,细胞需用无抗生素的培养基进行培养,待细胞生长至80%以上开始试验。
A、样品为细胞
1、弃去培养瓶内的细胞培养基。
2、用DPBS洗2次细胞。
3、加入适量的裂解液(以24孔板为例,每孔100ul)裂解细胞,室温放置5分钟。
4、收集细胞裂解液,放入离心管中。
5、细胞裂解液95°C处理5分钟。
6、13000rpm离心5分钟,上清转入一只新离心管。
7、取1~2ul上清作为模板进行PCR反应。
B、样品为培养上清
1、取1~1.5ml细胞培养上清,放入离心管中。
2、13000rpm离心5分钟。
3、弃上清,用DPBS洗沉淀一次。
4、加入100ul裂解液裂解细胞,上下颠倒混匀后,室温放置5分钟。
5、细胞裂解液95°C处理5分钟。
6、13000rpm离心5分钟,上清转入一只新离心管。
8、取1~2ul上清作为模板进行PCR反应。
2、PCR反应
本试剂盒提供的8连管已预加入反应引物(其中8号管同时已预加入阳性模板,为阳性对照),使用前请先离心后小心开启,以免飞扬丢失。Taq、pfu、KOD等酶及常规PCRMix都适用于本试剂盒的PCR反应,具体反应条件可以参考相关酶或者PCRMIX产品说明书。以Taq酶为例,推荐如下:
3、结果判定
在阴阳性对照成立的条件下,对样品结果进行判定
支原体检测试剂盒
【实验试例】
样品1为支原体检测阳性,其中M1污染严重,样品2和3为支原体检测阴性。
NEB100bpDNALadder
:100bp,200bp,300bp,400bp,500bp(加亮),600bp,700bp,800bp,900bp,1000bp(加亮),1200bp,1517bp。
上海乔羽生物主营产品:ELISA试剂盒,生化试剂,标准品对照品,试剂耗材,抗体,培养基,动物血清等等,欢迎来电咨询!