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乔羽讲述:细胞凋亡检测的优点和缺点

发布时间:2018-09-13 16:46 |  点击次数:

        以前,我们只关心细胞是死是活。现在,研究者的兴趣已不再局限于此,大家更关心细胞到底是怎么死的,哪条通路受到了影响,观察到的是凋亡的哪个阶段,甚至如何阻止它。
 

   细胞凋亡(apoptosis)指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。
 
   既然凋亡是一个相当复杂的信号级联,那么我们就有很多机会来评估参与其中的蛋白活性。随着凋亡相关蛋白的不断发现,我们也有了越来越多的检测对象。然而,凋亡和坏死的许多特征相互重叠,即使是福尔摩斯也难以分辨,因此有必要采用两种或更多不同的方法来验证细胞的死亡方式。一种检测早期凋亡事件,而另一种则瞄准晚期事件。多重分析现在也变得越来越普及,它能从同一个样品中获得两组或以上的数据。虽然可供选择的方法很多,但没有一种是放之四海而皆准的,每一种都有优点和缺点。因此,在选择凋亡检测方法时,了解每种分析的优缺点很关键。
 
  了解每个模式系统中细胞死亡的动力学同样很关键。某些蛋白,如caspase,表达的时间很短暂。正在经历凋亡的体外培养细胞,最终也必然会经历坏死。而且凋亡细胞会很快地死亡并消失。凋亡从开始到结束一共才2-3小时。因此,如果分析得太早或太晚,就难免出现假阴性。此外,凋亡可能以很低的频率出现,或只是出现在器官、组织中的特定位点。在这种情况下,快速地通览全局就很有用。总的来说,如果你需要细胞死亡机制的详细信息,那么毒素暴露的时间、待测化合物的浓度以及分析终点的选择就变得很重要。