碘化丙啶PI染色液(50ug/ml,含RNase)说明书

中文名称：碘化丙啶PI染色液(50ug/ml,含RNase)
产品规格：10ml
分类：细胞染色
用途：流式细胞仪分析细胞凋亡、细胞周期等，主要用于DNA染色。
注意事项：Propidium Iodide简称PI，又称碘化丙啶，分子量为668.40，对人体有刺激性，本试剂中含Rnase A，RNase浓度200ug/ml。
储存条件：-20℃，避光，6个月

简介：碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。碘化丙啶与双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被Propidium Iodide染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1～2之间。碘化丙啶PI染色液(50μg/ml,含RNase)主要由PI、破膜剂、RNase等组成，经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测， 亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。

操作步骤(仅供参考)：
1、细胞样品的制备：
⑴贴壁细胞：
① 收集上述细胞悬液到离心管内。
② 4℃，1000g离心，使细胞沉到管底。小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl培养液，以免吸走细胞。
③ 加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。
④ 4℃ 离心，使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞。
⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

⑵悬浮细胞：
① 4℃离心，使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl培养液，以免吸走细胞。
③ 加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。
④ 4℃离心，使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞
⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

2、细胞的固定：加入1ml冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2h或更长时间。4℃固定12～24h可能效果更佳。

3、细胞的清洗：
① 4℃ 离心，使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl溶液，以免吸走细胞。
③ 加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。
④ 4℃ 离心，使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞。
⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

4、 PI染色：在每个待检细胞样品中加入500μl配制好的PI染色工作液，轻轻重悬细胞沉淀，置于37℃避光水浴。
5、检测与分析：用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA或RNA含量分析和光散射分析。  

注意事项：
1、 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。
2、 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
3、 在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当提高离心力或延长离心时间。
4、 如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化后，制备成单细胞悬液
5、 PI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。