维生素B1检测试剂盒(荧光光度法)使用说明书

产品组成:
 名称 编号    R31918 50T     Storage    
试剂(A):VitaminB1标准(100μg/ml)    1ml    4℃避光    
试剂(B):组织匀浆液(10×)    250ml    RT    
试剂(C):样品校正液    100ml    RT    
试剂(D):沸石    100g    RT    
试剂(E):样品洗脱液    500ml    RT     
试剂(F):VitaminB1氧化液    120ml    RT    
试剂(G):VitaminB1检测液    30ml    RT避光    
试剂(H):硫酸盐    100g    RT    
试剂(I):亚硫酸盐    3×100mg    RT    
使用说明书    1份    

保质期:：6个月有效；4℃运输，4℃保存。

产品简介:
维生素B1(VitaminB1)又称硫胺素，属于水溶性维生素，在有氧化剂存在时容易被氧化产生脱氢硫胺素，后者在有紫外光照射时呈现蓝色荧光。
维生素B1检测试剂盒(荧光光度法)是利用VitaminB1水溶液在碱性盐溶液中能被氧化成蓝色的硫色素(一种荧光化合物)，在紫外线下硫色素发出荧光，在激发波长365nm，发射波长435nm，在没有其他荧光物质干扰时荧光强度与硫色素的浓度呈正比，可定量检测维生素B1的含量，如果样品中存在干扰物质，可用沸石吸附VitaminB1，以便去除待测样品中干扰荧光测定的杂质。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、蒸馏水
2、pH计
3、离心管或试管
4、正丁醇
5、荧光光度计

操作步骤(仅供参考):
1、稀释组织匀浆液：按组织匀浆液(10×):蒸馏水=1：9的比例稀释，获得1×组织匀浆液。
2、稀释标准品：取适量的VitaminB1标准(100μg/ml)，按VitaminB2标准(100μg/ml)：蒸馏水=1：99稀释成VitaminB1标准(1μg/ml)，4℃避光保存。
3、制备亚硫酸盐工作液：取一支试剂(I)-亚硫酸盐100mg粉末，充分溶解于0.5ml蒸馏水中配制成200mg/ml的亚硫酸盐工作液，即配即用。
4、(选做)制备样品：取待测材料如麦麸等，准确称量2~5g，加入研磨器内，加入少量1×组织匀浆液，研磨碎，再次用1×组织匀浆液研磨，最后一并倒入50ml离心管，补充1×组织匀浆液至25ml，充分混匀，沸水中孵育30min，冷却至室温，用样品校正液调节pH至4.5，3500g离心10min，取上清加入2g沸石，振摇30min，弃液，蒸馏水清洗沸石2次，弃洗液，加入2.5ml样品洗脱液搅拌沸石，洗脱2~3次，将洗脱液合并，并用样品洗脱液定容至10ml，即为样品净化液。VitaminB1氧化：按下表操作，注意避光操作。

加入物(ml)    空白管    测定管    标准空白管    标准管
VitaminB1标准(1μg/ml)    -    -    2.5    2.5
样品净化液    2.5    2.5    -    -
VitaminB1氧化液    1.5    0.9    1.5    0.9
VitaminB1检测液    -    0.6    -    0.6
振摇15s
正丁醇    5    5    5    5
剧烈振摇90s，静置分层，吸取下层溶液丢弃；上层溶液加入1.5g硫酸盐混匀使脱水。

VitaminB1检测：选用恰当的滤色片，测定的激发波长为365nm，发射波长为435nm，
提前预热仪器30min，分别检测测定管和标准管的荧光值，同时向空白管和标准空白管的
剩余液中加入0.05ml亚硫酸盐工作液，立即混匀，在20~30s内测出各管的荧光值，作为
各自的空白值。

计算：
VitaminB1含量(mg/100g)=(A测定-A空白)×S×N×100/｛(A标准-A标准空白)×m×1000｝
式中：A测定=测定管的荧光值
A空白=空白管的荧光值
S=标准管中VitaminB1含量（μg）
N=稀释倍数
A标准=标准管的荧光值
A标准空白=标准空白管的荧光值
m=样品的质量(g)

注意事项：
1、在上述操作中，要严格避免VitaminB1受到阳光直射。
2、待测样品如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。
3、如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。