植物总酚检测试剂盒(微板法)操作步骤

产品简介:
植物组织或果实中存在花青素、叶绿素、类胡萝卜素、类黄酮、酚类等物质，这些物质与果实等样品衰老过程密切相关，对其加工性能、存储、营养价值等都有重要影响，植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。
植物总酚检测试剂盒(微板法)检测原理是总酚(Total Phenol)溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提总酚，根据提取液的吸收光谱特性，可利用分光光度计在特定波长(280nm)处测定其吸光度，通过与标准曲线比较，计算出总酚含量，主要用于植物组织或果实中总酚的提取以及定量检测总酚含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
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​保质期:12个月有效；常温运输，4℃保存。

产品组成:
 名称 编号    R32067 100T     Storage    
试剂(A): 总酚标准(1mg/ml)    1.5ml    4℃ 避光    
试剂(B): TP Assay Buffer    2×500ml    RT    
使用说明书    1份    

自备材料：
1、实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织
2、研钵或匀浆器
3、离心管、离心机
4、滤纸或纱布
5、96 孔板
6、酶标仪

操作步骤(仅供参考):
1、总酚提取：
①取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品 0.25g，置于4℃预冷的研钵或匀浆器。
②加入4℃预冷的2~3ml TP Assay Buffer，充分研磨或匀浆后转入10ml离心管，用TP Assay Buffer 冲洗研钵或匀浆器并转移至离心管，补加TP Assay Buffer至8ml。
③4℃避光静置20min，期间摇动 2~3 次，然后过滤至离心管，也可用离心机8000r/min离心 3min，滤液(上清液)即为总酚粗提液。

2、稀释总酚标准溶液：取适量的总酚标准(1mg/ml)，按下表进行稀释：
加入物(μl)    1    2    3    4    5    6    
总酚标准(1mg/ml)    30    60    90    120    150    300    
蒸馏水    270    240    210    180    150    0    
总酚浓度(mg/ml)    0.1    0.2    0.3    0.4    0.5    1    

3、 TP 加样：取 96 孔板，按照下表设置空白孔、对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加
入，并注意避免产生气泡，小心混匀；如果样品中的总酚浓度过高，可以减少样品用量
或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置 2 平行孔，求平均值。
加入物(μl)    空白孔    标准孔    测定孔    
TP Assay Buffer    200    -    -    
系列总酚标准(1~6 号孔)    -    200    -    
总酚粗提液    -    -    200    

4、TP 测定：以空白调零，以酶标仪测定系列标准孔、测定孔在 280nm 处吸光度。

计算：
以 1~6 号孔系列总酚标准浓度(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1mg/ml)为横坐标，以对
应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，进而计算出各测定孔总酚含量(mg/ml)。
组织样品的总酚(mg/g)={C×VT}/(W×V1)
式中：C=根据标准曲线求得的测定管总酚含量(mg/ml)
VT=总酚粗提液总体积(ml)=8
V1=加样时所用总酚粗提液的体积(ml)=0.2
W=样品鲜重(g)
液体样品的总酚(mg/ml)=C×N/V
式中：C=根据标准曲线求得的测定管总酚含量(mg/ml)
V=加样时所用总酚粗提液的体积(ml)=0.2
N=稀释倍数

注意事项：
1、为了避免总酚见光分解，操作时应尽量避光，研磨或匀浆时应尽量缩短时间。
2、取样量、试剂用量应根据总酚含量适当调整。
3、TP Assay Buffer 应密闭保存，避免有效成分挥发。
4、如果没有酶标仪，也可以使用分光光度计测定。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。