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乔羽生物:如何排除酶联免疫试剂盒“边缘效应”

人阅读 发布时间:2017-05-17 15:31

我们在使用酶联免疫试剂盒 96 孔板的实验测定的时候,常发现有边缘效应,也就是外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。

聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规 ELISA 测定中,将板从室温(通常在 25℃ 左右)置于 37℃ 温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。

因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如 37℃),就可以很容易地排除
边缘效应,并且可提高测定的重复性。

    1.避免直接接触终止液和底物 A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

    2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

    3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

    4.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

    5.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

    6.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

    7.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物 A、B 液时,避免使用带金属部分的加样器。

    8.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里。

    9.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

    10.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取 OD 值。

    11.加入试剂的顺序应一致,保证所有反应板孔温育的时间一样。

    12.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

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