慢病毒包装的作用和关键点说明

　　慢病毒是逆转录病毒的一种，它能够将靶基因导入到一些较难转染的细胞，如原代细胞等，并且将靶基因随机整合到宿主的基因组中，从而大大增加了转染效率，并且能够在细胞系中稳定表达若干代，可以进行稳转细胞株的筛选。因为是随机整合，也有不确定因素，有些公司还能提供定点整合技术，将靶基因定点整合到基因组特定的部位，从而保证其高效表达并且对细胞不产生随机整合可能产生的伤害。

　　慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装shRNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。 　　慢病毒包装的几个关键点：

　　其关键点是细胞因素、载体系统（尽量使用成熟的商业化载体系统）、构建重组的质粒正确与否、质粒抽提纯化情况、包装转染控制（24、48小时的细胞及荧光状态判断）、目的基因对病毒包装影响(基因大小、序列情况、蛋白功能毒性等都会影响到是否能包装成功）。

　　纯化后的慢病毒保存方法：慢病毒纯化后的病毒用无血清的DMEM保存就可以了，一般放在-80度进行长久保存。如果收集的上清不想立即纯化可先放在-80度，等下次收集的一起纯化。目的蛋白在包装细胞中或者滴度测定细胞中会表达的，滴度测定就是根据目的蛋白表达情况来进行操作的。